ovoshchiОвощи РоссииVegetable crops of Russia2072-91462618-7132Федеральный научный центр овощеводства10.18619/2072-9146-2024-6-11-16ovoshchi-2518Research ArticleСЕЛЕКЦИЯ, СЕМЕНОВОДСТВО И БИОТЕХНОЛОГИЯ РАСТЕНИЙBREEDING, SEED PRODUCTION AND PLANT BIOTECHNOLOGYРаспространение генов TAL-эффекторов среди Xanthomonas campestris pv. campestris: поймай меня, если сможешьTAL-effectors occurrence among Xanthomonas campestris pv. campestris: catch me if you canhttps://orcid.org/0009-0007-2103-1067РажинаО. Л.RazhinaO. L.

Ражина Оксана Леонидовна - аспирант, младший научный сотрудник.

127512, Москва; 119991, Москва

Oksana L. Razhina - PhD Student, Junior Researcher.

Moscow, 127512; Moscow, 119991

oksana-razhina@yandex.ruhttps://orcid.org/0000-0001-5711-8331ЛебедеваМ. В.LebedevaM. V.

Лебедева Марина Валерьевна - кандидат биол. наук, старший научный сотрудник.

127512, Москва

Marina V. Lebedeva - Cand. Sci. (Biology), Senior Researcher.

Moscow, 127512

marilistik@mail.ruhttps://orcid.org/0009-0007-7180-892XЧерняевК. А.CherniaevK. A.

Черняев Кирилл Алексеевич - аспирант, младший научный сотрудник.

127512, Москва; 143072, Московская область, Одинцовский район, п. ВНИИССОК, ул. Селекционная, д.14

Kirill А. Cherniaev - PhD Student, Junior Researcher.

Moscow, 127512; 14, Selectsionnaya str., VNIISSOK, Odintsovo district, Moscow region, 143072

skdw12345@gmail.comhttps://orcid.org/0000-0003-2948-753XИгнатовА. Н.IgnatovA. N.

Игнатов Александр Николаевич - доктор биол. наук, профессор.

117198, Москва

Aleksandr N. Ignatov - Dr. Sci. (Biology), Professor.

Moscow, 117198

an.ignatov@gmail.comhttps://orcid.org/0000-0002-5014-8375ДжалиловФ. С-У.DzhalilovF. S.

Джалилов Февзи Сеид-Умерович - доктор биол. наук, проф., зав. кафедрой защиты растений.

127434, Москва, ул. Тимирязевская, 49

Fevzi S. Dzhalilov - Dr. Sci. (Biology), Professor, Head of the Plant Protection Department.

49, Timiryazevskaya st., Moscow, 127434

dzhalilov@rgau-msha.ruhttps://orcid.org/0000-0002-0728-0346ТарановВ. В.TaranovV. V.

Таранов Василий Васильевич - кандидат биол. наук, заведующий лабораторией стрессоустойчивости растений.

127512, Москва

Vasiliy V. Taranov - Cand. Sci. (Biology), Head of the Plant Stress Tolerance.

Moscow, 127512

v.taranov1@gmail.comФГБНУ Всероссийский Научно-Исследовательский Институт Сельскохозяйственной биотехнологии; Институт общей генетики им. Н.И. Вавилова РАНРоссияAll-Russia Research Institute of Agricultural Biotechnology; Vavilov Institute of General GeneticsRussian FederationФГБНУ Всероссийский Научно-Исследовательский Институт Сельскохозяйственной биотехнологииРоссияAll-Russia Research Institute of Agricultural BiotechnologyRussian FederationФГБНУ Всероссийский Научно-Исследовательский Институт Сельскохозяйственной биотехнологии; Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Федеральный научный центр овощеводства" (ФГБНУ ФНЦО)РоссияAll-Russia Research Institute of Agricultural Biotechnology; Federal State Budgetary Scientific Institution Federal Scientific Vegetable Center (FSBSI FSVC)Russian FederationФГАОУ ВО Российский университет дружбы народовРоссияPeople's Friendship University of RussiaRussian FederationФГБОУ ВО РГАУ - МСХА имени К.А. ТимирязеваРоссияRussian State Agrarian University - Moscow Timiryazev Agricultural Academy (RSAU-MTAA)Russian Federation202430112024061116Copyright © Ражина О.Л., Лебедева М.В., Черняев К.А., Игнатов А.Н., Джалилов Ф.С., Таранов В.В., 20242024Ражина О.Л., Лебедева М.В., Черняев К.А., Игнатов А.Н., Джалилов Ф.С., Таранов В.В.Razhina O.L., Lebedeva M.V., Cherniaev K.A., Ignatov A.N., Dzhalilov F.S., Taranov V.V.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.vegetables.su/jour/article/view/2518Актуальность

Актуальность. Бактерии Xanthomonas campestris pv. campestris (Xcc) вызывают сосудистый бактериоз у растений семейства Brassicaceae и распространены на всей территории их выращивания. Одним из факторов патогенности, встречающимся среди рода Xanthomonas, являются TAL-эффекторы - белки, проникающие в ядро растительной клетки при заражении и изменяющие экспрессию некоторых генов растения-хозяина для увеличения инфекционного успеха. Для некоторых видов рода Xanthomonas TAL-эффекторы являются необходимым условием заражения растения, однако их роль для Xcc остаётся не до конца ясной. Кроме того, даже распространение этих генов среди разных рас в разных регионах изучено слабо.

Целью нашей работы было изучить распространение генов TAL-эффекторов среди изолятов Xcc, найденных в России.

Материалы и методы

Материалы и методы. Для выполнения работы была сформирована выборка из изолятов Xcc разных рас, собранных преимущественно в Московской области и Краснодарском крае. Тотальная ДНК из бактерий выделялась с помощью СТАВ метода. Для поиска генов TAL-эффекторов использовался метод ПЦР. Каждый изолят был проверен с помощью четырёх пар праймеров, подобранных на консервативные участки гена.

Результаты

Результаты. Среди 50 проверенных изолятов было выявлено 4 изолята, содержащих гены TAL-эффекторов. Несмотря на то, что использовались праймеры, отжигающиеся на консервативные области гена, только две пары сработали для всех 4 изолятов. Это свидетельствует о полиморфизмах, который может быть следствием горизонтального переноса от других видов Xanthomonas. Низкое число изолятов с генами TAL-эффекторов может отражать особенности популяций Xcc в Московской области и Краснодарском крае или особенности генотипов выращиваемых растений-хозяев.

Relevance

Relevance. Xanthomonas campestris pv. campestrisis a widespread bacterial pathogen that causes a black rot disease of Brassicaceae plants. It is distributed across all territories with cultivated brassica crops and has high economic significance. One of the known Xanthomonas pathogenicity factor is TAL-effectors. These proteins penetrate in plant nucleus and change expression of some host genes in order to promote infection. For some Xanthomonas species TAL-effectors are a key of bacteria success, however for Xcc their role is still remain obscure as well as TALE occurrence among Xcc belonged to different races and originated from different regions. The goal of our study was examination of TALE distribution among Xcc isolates collected in Russia.

Methods

Methods. Sample of the Xcc isolates mainly collected in Moscow region and Krasnodar krai was used for TALE search. Bacterial total DNA was isolated using CTAB method. Four primer pairs were used for TALE genes detection by amplification conservative regions.

Results

Results. Among 50 isolates only 4 isolates possessed TALE were revealed. Low-frequency occurrence of TALE among Russian isolates can reflect Xcc population features in Moscow region and Krasnodar krai as well as genotype features of cultivated plant hosts.

Xanthomonas campestrisTAL-эффекторсосудистый бактериозBrassicaceaeXanthomonas campestrisTALEblack rot diseaseBrassicaceaeРабота выполнена при финансовой поддержки Министерства Науки и Высшего Образования России, проект № 075-15-2023-582.The work was supported by the Russian Ministry of Science and Higher Education, project No. 075-15-2023-582ReferencesDow J.M., Daniels M.J. Pathogenicity Determinants and Global Regulation of Pathogenicity of Xanthomonas campestris pv. campestris. In: Current Topics in Microbiology and Immunology. Berlin, Heidelberg: Springer Berlin Heidelberg; 1994. P. 29-41. https://doi.org/10.1007/978-3-642-78624-2_2Dow J.M., Daniels M.J. Pathogenicity Determinants and Global Regulation of Pathogenicity of Xanthomonas campestris pv. campestris. In: Current Topics in Microbiology and Immunology. Berlin, Heidelberg: Springer Berlin Heidelberg; 1994. P. 29-41. https://doi.org/10.1007/978-3-642-78624-2_2Vicente J.G., Conway J., Roberts S.J, Taylor J.D. Identification and Origin of Xanthomonas campestris pv. campestris Races and Related Pathovars. Phytopathology. 2001;91(5):492-499. https://doi.org/10.1094/phyto.2001.91.5.492Vicente J.G., Conway J., Roberts S.J, Taylor J.D. Identification and Origin of Xanthomonas campestris pv. campestris Races and Related Pathovars. Phytopathology. 2001;91(5):492-499. https://doi.org/10.1094/phyto.2001.91.5.492Kamoun S., Kamdar H.V., Tola E., Kado CI. A vascular hypersensitive responses: role of the hrpX locus. Mol. Plant-Microbe Interact.1992;(5):22-23. https://doi.org/10.1094/MPMI-5-022Kamoun S., Kamdar H.V., Tola E., Kado CI. A vascular hypersensitive responses: role of the hrpX locus. Mol. Plant-Microbe Interact.1992;(5):22-23. https://doi.org/10.1094/MPMI-5-022Fargier E., Manceau C. Pathogenicity assays restrict the species Xanthomonas campestris into three pathovars and reveal nine races within X. campestris pv. campestris. Plant Pathol. 2007;56(5):805-18. https://doi.org/10.1111/j.1365-3059.2007.01648.xFargier E., Manceau C. Pathogenicity assays restrict the species Xanthomonas campestris into three pathovars and reveal nine races within X. campestris pv. campestris. Plant Pathol. 2007;56(5):805-18. https://doi.org/10.1111/j.1365-3059.2007.01648.xCruz J., Tenreiro R., Cruz L. Assessment of diversity of Xanthomonas campestris pathovars affecting cruciferous plants in Portugal and disclosure of two novel X. campestris pv. campestris races. Journal of Plant Pathology. 2017;99(2):403-414. https://doi.org/10.4454/JPP.V99I2.3890Cruz J., Tenreiro R., Cruz L. Assessment of diversity of Xanthomonas campestris pathovars affecting cruciferous plants in Portugal and disclosure of two novel X. campestris pv. campestris races. Journal of Plant Pathology. 2017;99(2):403-414. https://doi.org/10.4454/JPP.V99I2.3890Ха В.Т.Н., Джалилов Ф.С., Виноградова С.В., Кырова Е.И., Игнатов А.Н. Генетическое разнообразие возбудителя сосудистого бактериоза в России: полиморфизм пцр фрагментов. Защита картофеля. 2014;(2):21-25. https://www.elibrary.ru/tmmlbtHa V.T.N., Dzhalilov F.S., Vinogradova S., Kyrova E., Ignatov A. Genetic diversity of black rot pathogen in Russia: Plant reaction. Zashchita Kartofelya. 2014;(2):21-25. (In Russ.) https://www.elibrary.ru/tmmlbtBoch J., Bonas U. Xanthomonas AvrBs3 family-type III effectors: Discovery and function. Annu Rev Phytopathol. 2010;48(1):419-36. https://doi.org/10.1146/annurev-phyto-080508-081936Boch J., Bonas U. Xanthomonas AvrBs3 family-type III effectors: Discovery and function. Annu Rev Phytopathol. 2010;48(1):419-36. https://doi.org/10.1146/annurev-phyto-080508-081936van Schie C.C.N., Takken F.L.W. Susceptibility genes 101: How to be a good host. Annu Rev Phytopathol. 2014;52(1):551-581. https://doi.org/10.1146/annurev-phyto-102313-045854van Schie C.C.N., Takken F.L.W. Susceptibility genes 101: How to be a good host. Annu Rev Phytopathol. 2014;52(1):551-581. https://doi.org/10.1146/annurev-phyto-102313-045854Yang B., Sugio A., White F.F. Os8N3 is a host disease-susceptibility gene for bacterial blight of rice. Proc Natl Acad Sci USA. 2006;103(27):10503-10508. https://doi.org/10.1073/pnas.0604088103Yang B., Sugio A., White F.F. Os8N3 is a host disease-susceptibility gene for bacterial blight of rice. Proc Natl Acad Sci USA. 2006;103(27):10503-10508. https://doi.org/10.1073/pnas.0604088103Antony G., Zhou J., Huang S., Li T., Liu B., White F., Yang B. Rice xa13 recessive resistance to bacterial blight is defeated by induction of the disease susceptibility gene Os-11N3. Plant Cell. 2010;22(11):3864-76. Available from: https://doi.org/10.1105/tpc.110.078964Antony G., Zhou J., Huang S., Li T., Liu B., White F., Yang B. Rice xa13 recessive resistance to bacterial blight is defeated by induction of the disease susceptibility gene Os-11N3. Plant Cell. 2010;22(11):3864-76. Available from: https://doi.org/10.1105/tpc.110.078964Yu Y., Streubel J., Balzergue S., Champion A., Boch J., Koebnik R., et al. Colonization of rice leaf blades by an African strain of Xanthomonas oryzae pv. oryzae depends on a new TAL effector that induces the rice nodulin-3 Os11N3 gene. Mol Plant Microbe Interact. 2011;24(9):1102-1113. https://doi.org/10.1094/mpmi-11-10-0254Yu Y., Streubel J., Balzergue S., Champion A., Boch J., Koebnik R., et al. Colonization of rice leaf blades by an African strain of Xanthomonas oryzae pv. oryzae depends on a new TAL effector that induces the rice nodulin-3 Os11N3 gene. Mol Plant Microbe Interact. 2011;24(9):1102-1113. https://doi.org/10.1094/mpmi-11-10-0254Streubel J., Pesce C., Hutin M., Koebnik R., Boch J., Szurek B. Five phylogenetically close rice SWEET genes confer TAL effector-mediated susceptibility to Xanthomonas oryzae pv. oryzae. New Phytol. 2013;200(3):808-819. https://doi.org/10.1111/nph.12411Streubel J., Pesce C., Hutin M., Koebnik R., Boch J., Szurek B. Five phylogenetically close rice SWEET genes confer TAL effector-mediated susceptibility to Xanthomonas oryzae pv. oryzae. New Phytol. 2013;200(3):808-819. https://doi.org/10.1111/nph.12411Cohn M., Bart R.S., Shybut M., Dahlbeck D., Gomez M., Morbitzer R., et al. Xanthomonas axonopodis virulence is promoted by a transcription activator-like effector-mediated induction of a SWEET sugar transporter in cassava. Mol Plant Microbe Interact. 2014;27(11):1186-1198. https://doi.org/10.1094/mpmi-06-14-0161-rCohn M., Bart R.S., Shybut M., Dahlbeck D., Gomez M., Morbitzer R., et al. Xanthomonas axonopodis virulence is promoted by a transcription activator-like effector-mediated induction of a SWEET sugar transporter in cassava. Mol Plant Microbe Interact. 2014;27(11):1186-1198. https://doi.org/10.1094/mpmi-06-14-0161-rCox K.L., Meng F., Wilkins K.E., Li F., Wang P., Booher N.J., et al. TAL effector driven induction of a SWEET gene confers susceptibility to bacterial blight of cotton. Nat Commun. 2017;8(1): 15588 https://doi.org/10.1038/ncomms15588Cox K.L., Meng F., Wilkins K.E., Li F., Wang P., Booher N.J., et al. TAL effector driven induction of a SWEET gene confers susceptibility to bacterial blight of cotton. Nat Commun. 2017;8(1): 15588 https://doi.org/10.1038/ncomms15588Hu Y., Zhang J., Jia H., Sosso D., Li T., Frommer W.B., et al. Lateral organ boundaries 1 is a disease susceptibility gene for citrus bacterial canker disease. Proc Natl Acad Sci USA. 2014;111(4):E521-E529. https://doi.org/10.1073/pnas.1313271111Hu Y., Zhang J., Jia H., Sosso D., Li T., Frommer W.B., et al. Lateral organ boundaries 1 is a disease susceptibility gene for citrus bacterial canker disease. Proc Natl Acad Sci USA. 2014;111(4):E521-E529. https://doi.org/10.1073/pnas.1313271111Zhang J., Huguet-Tapia J.C., Hu Y., Jones J., Wang N., Liu S., et al. Homologues of CsLOB1 in citrus function as disease susceptibility genes in citrus canker. Mol Plant Pathol. 2017;18(6):798-810. https://doi.org/10.1111/mpp.12441Zhang J., Huguet-Tapia J.C., Hu Y., Jones J., Wang N., Liu S., et al. Homologues of CsLOB1 in citrus function as disease susceptibility genes in citrus canker. Mol Plant Pathol. 2017;18(6):798-810. https://doi.org/10.1111/mpp.12441Zlobin N., Lebedeva M., Monakhova Y., Ustinova V., Taranov V. An ERF121 transcription factor from Brassicaoleracea is a target for the conserved TAL-effectors from different Xanthomonascampestris pv. campestris strains. Mol Plant Pathol. 2021;22(5):618-24. https://doi.org/10.1111/mpp.13048Zlobin N., Lebedeva M., Monakhova Y., Ustinova V., Taranov V. An ERF121 transcription factor from Brassicaoleracea is a target for the conserved TAL-effectors from different Xanthomonascampestris pv. campestris strains. Mol Plant Pathol. 2021;22(5):618-24. https://doi.org/10.1111/mpp.13048Schwartz A.R., Morbitzer R., Lahaye T., Staskawicz B.J. TALE-induced bHLH transcription factors that activate a pectate lyase contribute to water soaking in bacterial spot of tomato. Proc Natl Acad Sci USA. 2017;114(5):E897-E903. https://doi.org/10.1073/pnas.1620407114Schwartz A.R., Morbitzer R., Lahaye T., Staskawicz B.J. TALE-induced bHLH transcription factors that activate a pectate lyase contribute to water soaking in bacterial spot of tomato. Proc Natl Acad Sci USA. 2017;114(5):E897-E903. https://doi.org/10.1073/pnas.1620407114Christian M., Cermak T., Doyle E.L., Schmidt C., Zhang F., Hummel A., et al. Targeting DNA double-strand breaks with TAL effector nucleases. Genetics. 2010;186(2):757-761. https://doi.org/10.1534/genetics.110.120717Christian M., Cermak T., Doyle E.L., Schmidt C., Zhang F., Hummel A., et al. Targeting DNA double-strand breaks with TAL effector nucleases. Genetics. 2010;186(2):757-761. https://doi.org/10.1534/genetics.110.120717Erkes A., Grove R.P., Zarkovic M., Krautwurst S., Koebnik R., Morgan R.D., et al. Assembling highly repetitive Xanthomonas TALomes using Oxford Nanopore sequencing. BMC Genomics. 2023;24(1):151. https://doi.org/10.1186/s12864-023-09228-1Erkes A., Grove R.P., Zarkovic M., Krautwurst S., Koebnik R., Morgan R.D., et al. Assembling highly repetitive Xanthomonas TALomes using Oxford Nanopore sequencing. BMC Genomics. 2023;24(1):151. https://doi.org/10.1186/s12864-023-09228-1Ferreira R.M., de Oliveira A.C.P., Moreira L.M., Belasque J.Jr., Gourbeyre E., Siguier P., et al. A TALE of transposition: Tn 3 -like transposons play a major role in the spread of pathogenicity determinants of Xanthomonas citri and other xanthomonads. MBio [Internet]. 2015;6(1). https://doi.org/10.1128/mbio.02505-14Ferreira R.M., de Oliveira A.C.P., Moreira L.M., Belasque J.Jr., Gourbeyre E., Siguier P., et al. A TALE of transposition: Tn 3 -like transposons play a major role in the spread of pathogenicity determinants of Xanthomonas citri and other xanthomonads. MBio [Internet]. 2015;6(1). https://doi.org/10.1128/mbio.02505-14Denance N., Szurek B., Doyle E.L., Lauber E., Fontaine-Bodin L., Carrere S., et al. Two ancestral genes shaped the Xanthomonas campestris TAL effector gene repertoire. New Phytol. 2018;219(1):391-407. https://doi.org/10.1111/nph.15148Denance N., Szurek B., Doyle E.L., Lauber E., Fontaine-Bodin L., Carrere S., et al. Two ancestral genes shaped the Xanthomonas campestris TAL effector gene repertoire. New Phytol. 2018;219(1):391-407. https://doi.org/10.1111/nph.15148Chu Z., Fu B., Yang H., Xu C., Li Z., Sanchez A., et al. Targeting xa13, a recessive gene for bacterial blight resistance in rice. Zuchter Genet Breed Res. 2006;112(3):455-461. https://doi.org/10.1007/s00122-005-0145-6Chu Z., Fu B., Yang H., Xu C., Li Z., Sanchez A., et al. Targeting xa13, a recessive gene for bacterial blight resistance in rice. Zuchter Genet Breed Res. 2006;112(3):455-461. https://doi.org/10.1007/s00122-005-0145-6Hutin M., Sabot F., Ghesquiere A., Koebnik R., Szurek B. A knowledge-based molecular screen uncovers a broad-spectrum OsSWEET14 resistance allele to bacterial blight from wild rice. Plant J. 2015;84(4):694-703. https://doi.org/10.1111/tpj.13042Hutin M., Sabot F., Ghesquiere A., Koebnik R., Szurek B. A knowledge-based molecular screen uncovers a broad-spectrum OsSWEET14 resistance allele to bacterial blight from wild rice. Plant J. 2015;84(4):694-703. https://doi.org/10.1111/tpj.13042Mokryakov M.V., Abdeev I.A., Piruzyan E.S., Schaad N.W., Ignatov A.N. Diversity of effector genes in plant pathogenic bacteria of genus Xanthomonas. Microbiology. 2010;79(1):58-65. https://doi.org/10.1134/s002626171001008xMokryakov M.V., Abdeev I.A., Piruzyan E.S., Schaad N.W., Ignatov A.N. Diversity of effector genes in plant pathogenic bacteria of genus Xanthomonas. Microbiology. 2010;79(1):58-65. https://doi.org/10.1134/s002626171001008xKay S., Boch J., Bonas U. Characterization of AvrBs3-like effectors from a Brassicaceae pathogen reveals virulence and avirulence activities and a protein with a novel repeat architecture. Mol Plant Microbe Interact. 2005;18(8):838-48. https://doi.org/10.1094/mpmi-18-0838Kay S., Boch J., Bonas U. Characterization of AvrBs3-like effectors from a Brassicaceae pathogen reveals virulence and avirulence activities and a protein with a novel repeat architecture. Mol Plant Microbe Interact. 2005;18(8):838-48. https://doi.org/10.1094/mpmi-18-0838Лазарев А.М., Мысник Е.Н., Игнатов А.Н. Ареал и зона вредоносности сосудистого бактериоза капусты. Вестник защиты растений. 2017;1(91):52-55. https://www.elibrary.ru/wfqynd [Lazarev A.M., Mysnik E.N., Ignatov A.N. Area and zone of harmfulness of vascular bacteriosis of cabbage. Plant Protection News. 2017;1(91):52-55. (In Russ.) https://www.elibrary.ru/wfqynd]Lazarev A.M., Mysnik E.N., Ignatov A.N. Area and zone of harmfulness of vascular bacteriosis of cabbage. Plant Protection News. 2017;1(91):52-55. (In Russ.) https://www.elibrary.ru/wfqyndРевин В.В., Лияськина Е.В., Покидько Б.В., Пименов Н.В., Марданов А.В., Равин Н.В. Характеристика нового штамма Xanthomonas campestris М 28-продуцента ксантана, исследование генома, условий культивирования и физико-химических и реологических свойств полисахарида. Прикладная химия и микробиология. 2021;57(3):251-261. https://doi.org/10.31857/s0555109921030107. https://www.elibrary.ru/gbfrvpRevin V.V., Liyas'kina E.V., Pokid'ko B.V., Pimenov N.V., Mardanov A.V., Ravin N.V.. Charachteristics of a new strain of Xanthomonas campestris M 28 - a xanthan producer, study of the genome, cultivation conditions and physicochemical and rheological properties of the polysaccharide. Applied Biochemistry And Microbiology. 2021;57(3):251-261. (In Russ.) https://doi.org/10.31857/s0555109921030107. https://www.elibrary.ru/gbfrvpPlant Protection Research Institute (South Africa), BioNET-INTERNATIONAL., Switzerland. Direktion fur Entwicklungszusammenarbeit und Humanitare Hilfe. Introduction to practical phytobacteriology: A manual for phytobacteriology. 1999.Plant Protection Research Institute (South Africa), BioNET-INTERNATIONAL., Switzerland. Direktion fur Entwicklungszusammenarbeit und Humanitare Hilfe. Introduction to practical phytobacteriology: A manual for phytobacteriology. 1999.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.